Apoptózist indukáló Tet-on eukarióta expressziós vektorok ősszeállítása és vizsgálata

Nyomtatóbarát változatNyomtatóbarát változat
Konferencia: 
2010/2011. tanév
Tagozat: 
Biokémia, Mikrobiológia, Immunológia
Előadó szerző adatai
Név (format for foreign students: Last Name, First Name): 
Berényi Erika
2. szerző adatai
Név (format for foreign students: Last Name, First Name): 
Kristóf Endre Károly

Előadás adatai

Előadás címe: 
Apoptózist indukáló Tet-on eukarióta expressziós vektorok ősszeállítása és vizsgálata
Összefoglaló: 

A szintetikus biológia új szalagcím a biológiai kutatásban. Olyan eljárásokat takar, amelyek különböző forrásból származó biológiai elemekből célszerűen tervezett rendszereket igyekeznek létrehozni a mérnöki elme tervezőkészségével múlva fölül, egészítve ki azt, amit a természet létrehozott.
A szintetikus biológia és az élő sejt-terápia házassága azzal kecsegtet, hogy sejteket tudunk majd felruházni tetszőleges funkciókkal olyan genetikai hálózatok formájában, melyek ideális esetben a szervezetben farmakonokkal vezérelhetők. Az általunk összeállított tetracyclin szabályozta expressziós rendszerben az apoptózis az implementált funkció, másrészt, úgy is tekinthetjük, mint ”kikapcsoló” mechanizmust, mely lehetővé teszi, hogy egy mérnökileg módosított sejt, miután elvégezte feladatát, elhaljon, így időleges hatást tudjon kifejteni szöveti környezetben. A létrehozott rendszerben a baktériális eredetű TetR (tetracyclin represszor) protein kötődni képes egy a citomegalovírus genomból származó promóter előtti Tetracyclin Reszponzív Elemhez (TRE) megakadáyozva ezzel a promóter által hajtott gén kifejeződését. Ezt a gátlást doxycyclin (egy stabil tetracyclin analóg) adásával felfüggeszthetjük, a szabályozott gén kifejeződését biztosítva. A klónozás során a pSB1A3 ampicillin rezisztenciát kódoló hordozó vektort retrikciós enzimekkel megnyitottuk és a TRE-CMV (Tetraciklin válaszadó elem-minimál Citomegalovírus promóter), Bax (apoptózist indukáló protein) és a PolyA (transzkripció végét jelző szekvencia) inzerteket beillesztettük. A klónozás sikerességét restrikciós emésztéssel, az inzert méretek alapján ellenőriztük. A restrikciós analízis igazolta a pSB1A3-TRE-CMV-Bax-polyA expressziós vektor kialakításának sikerességét. A génkifejeződést fehérje szinten Western-blottal akarjuk vizsgálni, anti-Bax és hasított PARP antitesteket alkalmazva. Tervezzük még további apoptózis markerek kimutatását, sejthalál méréseket, valamint a Tet-On rendszer doxycyclin függésének vizsgálatát.

1. témavezető adatai
Név: 
Fésüs László
Intézet / Tanszék/ Klinika: 
DEOEC Biokémiai és Molekuláris Biológiai Intézet
2. témavezető adatai
Név: 
Demény Máté
Intézet / Tanszék/ Klinika: 
DEOEC Biokémiai és Molekuláris Biológiai Intézet
Díj: 
különdíj

Támogatók: Támogatók: Az NTP-TDK-14-0007 számú, A Debreceni Egyetem ÁOK TDK tevékenység népszerűsítése helyi konferencia keretében, az NTP-TDK-14-0006 számú, A Debreceni Egyetem Népegészségügyi Karán folyó Tudományos Diákköri kutatások támogatása, NTP-HHTDK-15-0011-es A Debreceni Egyetem ÁOK TDK tevékenység népszerűsítése 2016. évi helyi konferencia keretében, valamint a NTP-HHTDK-15-0057-es számú, A Debreceni Egyetem Népegészségügyi Karán folyó Tudományos Diákköri kutatások támogatása című pályázatokhoz kapcsolódóan az Emberi Erőforrás Támogatáskezelő, az Emberi Erőforrások Minisztériuma, az Oktatáskutató és Fejlesztő Intézet és a Nemzeti Tehetség Program