A PPAR gamma és STAT6 lehetséges direkt kölcsönhatásának feltérképezése

Nyomtatóbarát változatNyomtatóbarát változat
Konferencia: 
2010/2011. tanév
Tagozat: 
Biokémia, Mikrobiológia, Immunológia
Előadó szerző adatai
Név (format for foreign students: Last Name, First Name): 
Dániel Bence

Előadás adatai

Előadás címe: 
A PPAR gamma és STAT6 lehetséges direkt kölcsönhatásának feltérképezése
Összefoglaló: 

A PPARg a magreceptorok szupercsaládjának egyik tagja, amely a zsíranyagcsere és a gyulladásos válaszreakciók szabályozásában játszik szerepet. Munkánk központi kérdése annak megértése, hogyan szabályozódik a PPARg válaszadó képessége makrofágokban. Irodalmi adatokból ismert, hogy az egyes sejttípusokra jellemző fehérjemintázatokat különböző transzkripciós faktorok összehangolt együttműködése határozza meg. Laboratóriumunk kutatásainak eddigi eredményei szerint a PPARg alternatívan aktivált makrofágokban például az interleukin-4 hatására aktiválódó STAT6 molekulával együttműködve szabályozza, egyik közismert célgénjének, az FABP4-nek a kifejeződését. A STAT-ok olyan, főként citokinek által aktiválódó jelátvivő fehérjék, amelyek tirozin foszforilációt követően dimerizálódnak, a sejtmagba vándorolnak, majd DNS-hez kapcsolódva közvetlenül szabályozzák célgénjeik kifejeződését. A STAT6 eddigi legismertebb funkciói a Th2 típusú sejtek proliferációjának, differenciációjának és válaszképességének szabályozása.
Munkánk alapjául az a hipotézis szolgál, miszerint az IL-4 által aktivált STAT6 a PPARg transzkripciós aktivitását közvetlen kölcsönhatásuk révén módosítja. Előzetes eredményeink bebizonyították, hogy emlős sejtekben túltermeltetett PPARg és STAT6 között közvetlen kölcsönhatás lép fel. A jelen munka célja ennek a kölcsönhatásnak a feltérképezése GST-pulldown módszerrel. Ehhez először nyolc darab, V5-tel kapcsolt STAT6 plazmid konstrukciót készítettünk, amelyek a teljes hosszúságú molekulát és annak különböző hosszúságú darabjait kódolják. Ezt követően E. coli baktériumból GST-hez kapcsolt, teljes hosszúságú PPARg-t tisztítunk, amit a különböző hosszúságú STAT6 doméneket kifejező HEK293T sejtlizátumokkal inkubálunk. Inkubálás és mosás után a komplexeket poliakrilamid gélelektroforézissel elválasztjuk, azt követően pedig Western blot módszerrel ellenőrizzük, hogy a STAT6 mely doménje vesz részt a két molekula kölcsönhatásában.
Eredményeink közelebb vihetnek bennünket azoknak a molekuláris mechanizmusoknak a megértéséhez, amelyek a PPARg válaszadó képességének szabályozásán keresztül a makrofágok sejtspecifikus génkifejeződését meghatározzák.

1. témavezető adatai
Név: 
Nagy Zsuzsanna
Intézet / Tanszék/ Klinika: 
Biokémiai és Molekuláris Biológiai Intézet

Támogatók: Támogatók: Az NTP-TDK-14-0007 számú, A Debreceni Egyetem ÁOK TDK tevékenység népszerűsítése helyi konferencia keretében, az NTP-TDK-14-0006 számú, A Debreceni Egyetem Népegészségügyi Karán folyó Tudományos Diákköri kutatások támogatása, NTP-HHTDK-15-0011-es A Debreceni Egyetem ÁOK TDK tevékenység népszerűsítése 2016. évi helyi konferencia keretében, valamint a NTP-HHTDK-15-0057-es számú, A Debreceni Egyetem Népegészségügyi Karán folyó Tudományos Diákköri kutatások támogatása című pályázatokhoz kapcsolódóan az Emberi Erőforrás Támogatáskezelő, az Emberi Erőforrások Minisztériuma, az Oktatáskutató és Fejlesztő Intézet és a Nemzeti Tehetség Program