A poli-ADP-riboziláció szerepének vizsgálata SAOS sejtek differenciálódásában

Nyomtatóbarát változatNyomtatóbarát változat
Konferencia: 
2010/2011. tanév
Tagozat: 
Biokémia, Mikrobiológia, Immunológia
Előadó szerző adatai
Név (format for foreign students: Last Name, First Name): 
Kiss Katalin

Előadás adatai

Előadás címe: 
A poli-ADP-riboziláció szerepének vizsgálata SAOS sejtek differenciálódásában
Összefoglaló: 

Az oszteoszarkóma a leggyakoribb primer csontdaganat, amelyre jellemző a tumor sejtek direkt csontszövet-, illetve osteoid termelése. Vizsgálatainkat SAOS-2 sejtvonalon végeztük, mely egy osteoszarkóma eredetű osteoblast epitél sejtvonal. A SAOS-2 sejtek részletesen jellemzettek, magas osztódási rátával bírnak, alkalikus foszfatáz aktivitásuk révén megfelelő médium jelenlétében képesek kalcium depozícióra, íly módon megfelelő modellrendszernek tekinthetők a csont differenciálódás vizsgálatára. A poli-ADP-riboziláció egy reverzibilis poszttranszlációs módosítás. A poli(ADP-ribóz) polimeráz-1 (PARP-1) aktiválódását követően szubsztrátját, a NAD+-ot nikotinamidra és ADP-ribózra hasítja, melyet fehérjék glutamát és aszpartát oldalláncácához kapcsolva hosszú, elágazó polimert szintetizál. A poli(ADP-ribóz) polimerek életideje nagyon rövid, lebontásukért a poli(ADP-ribóz) glikohidroláz (PARG) felel. A poli-ADP-ribozilációnak kitüntetett szerepe van a genomi integritás fenntartásában, DNS hibajavításban, a sejthalál és egyes transzkripciós folyamatok szabályozásában. Vizsgálatainkban arra kerestünk választ vajon ez a dinamikus fehérjemódosítási folyamat szerepet játszik-e a csontdifferenciálódás szabályozásában. Korábban, a PARP-1 és PARG fehérjék stabil géncsendesítését lentivírus részecskékkel valósítottuk meg. A csendesítés hatékonyságát, mRNS szinten, hagyományos és kvantitív PCR-al is vizsgáltuk. Megfelelő antitest hiányában a fehérjék deplécióját funkció-kiesési vizsgálattal elemeztük immuncitokémiával és Western blott technikával. Hidrogén peroxiddal kezelt sejtekben jelentős poli(ADP-ribóz) polimer képződést tapasztaltunk. A polimerek lebontása jelentős mértékben elhúzódott a PARG hiányos SAOS sejtekben. A csontdifferenciálódási folyamatot 12 napon keresztül követtük nyomon aszkorbinsav-2-foszfáttal, D-vitaminnal, dexametazonnal és béta-glicerol foszfáttal kiegészített médium jelenlétében. A differenciálódás során vizsgáltuk az alkalikus foszfatáz aktivitásának változását valamint a kalcium depozíciót kvalitatív, AlizarinRed festési eljárással és kvantitatív kalcium kolorimetriás mérőmódszer segítségével.

1. témavezető adatai
Név: 
Erdélyi Katalin
Intézet / Tanszék/ Klinika: 
Orvosi Vegytani Intézet

Támogatók: Támogatók: Az NTP-TDK-14-0007 számú, A Debreceni Egyetem ÁOK TDK tevékenység népszerűsítése helyi konferencia keretében, az NTP-TDK-14-0006 számú, A Debreceni Egyetem Népegészségügyi Karán folyó Tudományos Diákköri kutatások támogatása, NTP-HHTDK-15-0011-es A Debreceni Egyetem ÁOK TDK tevékenység népszerűsítése 2016. évi helyi konferencia keretében, valamint a NTP-HHTDK-15-0057-es számú, A Debreceni Egyetem Népegészségügyi Karán folyó Tudományos Diákköri kutatások támogatása című pályázatokhoz kapcsolódóan az Emberi Erőforrás Támogatáskezelő, az Emberi Erőforrások Minisztériuma, az Oktatáskutató és Fejlesztő Intézet és a Nemzeti Tehetség Program