A kataláz enzim szubsztrátja a hidrogén-peroxid, amely kis koncentrációban fiziológiás, míg nagy koncentrációban toxikus a különböző sejtekre, vörösvértestekre és a DNS-re. A kataláz enzim bontja a hidrogén-peroxidot vízre és oxigénre. A humán kataláz fehérjét kódoló kataláz gén 34 kb nagyságú és a 11-es kromoszóma rövid karjának p13-as lókuszán található. 13 exonból és 12 intronból épül fel.
A laboratóriumban végzett kísérletes munkám során célom az volt, hogy a kataláz enzimet kódoló gén 6. exon polimorfizmusait vizsgáljam kontroll mintákban és olyan egyének DNS mintáiban, akiknél korábban valamilyen betegséget diagnosztizáltak (1-es, 2-es típusú, gestatios diabetes mellitust, időskori halláskárosodást és β-thalassemiát). A kataláz aktivitás referencia tartománya 80,3-146,3 MU/l. Olyan hypokatalazémiás egyénektől származtak a vizsgálatokhoz szükséges DNS minták, akiknek 56,7 MU/l (a referencia tartomány átlagának 50 %-a) alatti volt a kataláz aktivitása.
A vérkataláz aktivitását EDTA-val alvadásgátolt teljes vérből, spektrofotometriás eljárással határoztam meg. Ezután DNS izolálást végeztem QIAamp® DNA Blood Mini Kittel (QIAGEN). PCR technika alkalmazásával amplifikáltam az izolált DNS-t 6. exonra specifikus primerekkel. A kapott PCR terméket SSCP (Single-strand conformation polymorphism) pufferrel egyszálúsítottam. Ezt követően poliakrilamid gélelektroforézissel vizsgáltam. A DNS fragmenteket ezüstfestéssel tettem láthatóvá.
A kataláz enzimet kódoló gén 6. exonjának vizsgálata során polimorfizmusra utaló jeleket találtam egy mintánál (IB 132). Így DNS szekvencia analízis történt ebből a mintából. A DNS szekvencia analízist követően összehasonlítottam az IB 132-es minta nukleotid sorrendjét a referencia gén nukleotid sorrendjével, nem tudtam azonosítani a kataláz enzimet kódoló gén 6. exonjában sem új, sem pedig olyan mutációkat, SNP-ket, amiket korábban már közöltek.
Arra a következtetésre jutottam, hogy a csökkent kataláz aktivitású mintákban nem a 6. exonban lévő nukleotid eltérés az oka a kataláz csökkent aktivitásának. Ezért további vizsgálatok szükségesek a csökkent kataláz aktivitás okainak feltárására.