A Smith-Lemli-Opitz szindróma (SLO) egy súlyos monogénes, autoszomális recesszíven öröklődő genetikai betegség. A széles klinikai spektrum súlyos esetben mentális retardációt, autisztikus vonásokat, többszörös veleszületett rendellenességeket is magában foglal, míg az enyhébb esetekben tanulási nehézségek és viselkedési problémák dominálhatnak. Az érintett gén a koleszterin bioszintézis utolsó lépését katalizáló DHCR7, mely a 7-dehidro koleszterin - koleszterin átalakítást végzi. A metabolikus betegségekben általános módon mind a prekurzor felszaporodása, mind a végtermék hiánya a tünetek oka. Az SLO prevalenciája 1:20000 - 1:70000 közé tehető. Az oki mutációk nagyfokú interetnikai variabilitást mutatnak, és mutációs forrópont hiányában az SLO molekuláris diagnosztikája a DHCR7 gén direkt szekvenálására épül. Az SLO kapcsolatba hozható az ismeretlen eredetű spontán bekövetkező vetélésekkel is.
Munkánk célja egy olyan kísérleti rendszer optimalizálása, melyben a DHCR7 gén kódoló exonjainak vizsgálata gyorsan, költséghatékonyan megvalósítható új generációs DNS szekvenálás módszerével.
A 7 kódoló exont 8 PCR formájában amplifikáltuk. A PCR primerek 5' végére egy univerzális szekvenciát illesztettünk. Az első PCR reakciót követően a PCR termékeket 1000-szeresre higítottuk, majd azonos hibridizációs szekvenciával és különböző egyedi szekvenciával rendelkező (molekuláris vonalkód) primerek felhasználásával amplifikáltuk. Az optimalizáció során sikerült olyan hibridizációs hőmérsékletet találni és kísérleti körülményeket kialakítani, mely az első körös PCR reakciók multiplexálást lehetővé teszi. Az optimalizált rendszerben 2 reakcióban amplifikáljuk a 8 szakaszt. Eredményeink alapján a DHCR7 génmutációk az amplikon alapú új generációs DNS szekvenálás módszerével igen nagy áteresztőképességgel, a molekuláris, teljes gén vizsgálat alapú populációs szinten vizsgálhatók.