Mesterséges szénhidrát antigének szintézise és vizsgálata MALDI-TOF tömegspektrometriai és kapilláris gélelektroforetikus módszerekkel (CGE)

Az oligoszacharidok olyan kis molekulatömegű haptének, melyek önmagukban immunválasz kiváltására alkalmatlanok, de ha makromolekuláris hordozóhoz kapcsoljuk, az így kapott mesterséges szénhidrát antigén (neoglikoprotein) immunogén tulajdonságúvá válik. Ezt a jellemvonást kihasználva mesterséges antigéneket állítottunk elő monoklonális antitestek termeltetése céljából. Az oligoszacharidok hordozóhoz kapcsolásánál Gray és Schwartz által kifejlesztett reduktív aminálást használtuk. A módszer elve, hogy olyan Schiff bázis jön létre a szénhidrát és a fehérje között, ahol a fehérje amino csoportja hozzákapcsolódik a hídmolekula aldehid csoportjához, majd a Schiff bázis redukálódik és végül egy stabil kovalens kötés jön létre. Kísérleteink során sikerült borjú szérum albumin (BSA) fehérjéhez maltózt konjugáltatni. Az eljárás során a maltóz szabad redukáló végi egységét, mely „rejtett” aldehid funkcióval rendelkezett, reagáltattuk a fehérje amino csoportjaival. Ilyenkor a diszacharid redukáló végét „feláldoztuk” és a redukáló végi monoszacharid egységből keletkezett a hídmolekula. A reduktív aminálás egy másik változatát, a „nem rejtett” aldehiddel történő konjugálást is elvégeztük. Itt a maltózt a hordozó fehérjéhez a terminális végén aldehid funkciós csoportot tartalmazó aglikonon, azaz formil-heptil hídmolekulán (spaceren) keresztül kapcsoltuk a fehérjéhez. Ebben az esetben az immunológiai szempontból értékes szénhidrát egység teljes egészében konjugálódott a fehérjéhez, nem kellett feláldozni a szénhidrát redukáló végi egységét. Továbbá az antigének tömegét és a fehérjére felvihető szénhidrátok számát MALDI-TOF tömegspektrometriával és kapilláris gélelektroforézissel is meghatároztuk. A két eltérő mérési elven alapuló módszer közel azonos eredményeket szolgáltatott a glikozidációs pontok számát illetően. Ennek az ismerete azért is fontos, mivel jó immunológiai reakció kiváltásához ismernünk kell a fehérjére felvitt szénhidrátok számát. Az immunizálás jelenleg is folyamatban van a szintetizált antigének felhasználásával.