Munkám során az antioxidáns enzimrendszer egyik tagját: a kataláz enzimet vizsgáltam molekuláris biológiai módszerekkel. Az enzim szubsztrátja a H2O2, bontása során víz és oxigén keletkezik. A folyamat elégtelen működésének következtében a szervezetet érő oxidatív stressz számos betegséget indukálhat. Kísérletes munkám célja a kataláz enzim 13.4 exon polimorfizmusainak vizsgálata volt.
A kataláz gén 13.4 exonja 301 bázispárból áll, amelyben 11 SNP-t regisztráltak.(www. NCBI refseq). Ez a szakasz fehérjét nem kódol, de tartalmazza például a poliadenilációs-szignált, melynek a képződő mRNS stabilitásának elősegítésében, továbbá a transzláció során a riboszómális apparátus felismerésében, illetve transzportfolyamatokban van szerepe.
Kísérleti munkámhoz klinikai szakrendelésekről érkezett vérmintákat használtam, amelyeknek csökkent volt a kataláz aktivitása (hypokatalazémia). Spektrofotometriás aktivitásmérés után Quiagen Kit segítségével DNS-t izoláltam, majd PCR reakciót készítettem. Az amplifikált DNS-t SSCP mutáció-szűrő eljárással kezeltem, majd poliakrilamid gélelektroforézissel szétválasztottam az egyszálú és kétszálú DNS-t, a sávokat pedig ezüstfestéssel tettem láthatóvá.
A kiértékelés során a DNS-sávok mintázatát vizsgáltam. Összesen 62 mintát értékeltem, ebből 2 minta esetében találtam aspecifikus mintázatot, a kiválasztott mintákat szekvenáltattam. A szekvenciákat kiértékelve mindkét mintánál a vad típust detektáltam.
Az eredmények alapján megállapítottam, hogy a vizsgált mintákban a kataláz enzim csökkent aktivitása nem hozható összefüggésbe a kataláz gén 13.4 exon szakasszal.