A tumorantigének membrántopológiája és mobilitása meghatározza az újraprogramozott T sejtek daganatpusztító képességét

A kiméra antigén receptorral (CAR) transzfektált citotoxikus T sejtek új lehetőséget jelentenek a daganatkezelésben. A melanoma sejteken kifejezett p97 melanotransferrin és nagy moltömegű melanóma asszociált antigén (HMW-MAA) ellen irányított T sejtek lényegesen nagyobb ölőképességet mutatnak a p97 esetén, annak ellenére, hogy mindkét CAR azonos affinitású és az antigén expresszió is hasonló mértékű.
Munkánk során azt vizsgáltuk élő melanóma sejtek immunfluoreszcenciás jelölést követő konfokális mikroszkópiás és fluoreszcencia korrelációs spektroszkópiás mérésével, hogy a két antigénen keresztül kifejtett ölőhatás eltérő volta kapcsolódik-e azok eltérő membránbeli szerveződéséhez.
Méréseink szerint a p97 280 nm, vagy annál kisebb átmérőjű klaszterekbe szerveződik és 44±22 ms körüli diffúziós korrelációs időt mutat, valamint egy lassabb, 1-3 s nagyságrendű komponens is kimutatható, mely a kis csoportok együttes diffúziójából eredhet. A HMW-MAA szigetei 738±85 nm méretűek és keresztkorrelációs koefficiense alapján (C=0.46±0.06) jelentősen átfed GM1 pozitív lipid tutajokkal. A szigeteken belül diffúziója a p97-hez képest lassabb (korrelációs idő 124±42 ms). A két antigén jelölődése nem mutat átfedést, és keresztkorrelációs spektroszkópiával sem mutatható ki ko-diffúziójuk. A membrán koleszterol MBCD-nel történő kivonása 5 mM koncentráció és 30 perc inkubációs idő felett sejtszéteséshez vezet, de az épen maradt sejtek életképességét a kontrollhoz képest nem befolyásolja lényegesen. Ugyanakkor a HMW-MAA lipid tutajbeli lokalizációját lecsökkenti (C=0.24±0.09) és egy s nagyságrendű diffúziós komponens megjelenését eredményezi, amely mögött állhatnak kisebb HMW-MAA aggregátumok.
Összességében arra következtethetünk, hogy a p97 kisebb, mobilisabb, lipid tutajoktól független klaszterei és/vagy az azokon belüli gyorsabb diffúzió elősegítheti annak immunszinapszisba gyűjtését, és rajta keresztül az ölés beindítását, míg a HMW-MAA alacsonyabb mobilitása és kötöttsége a raft doménekhez gátolja mindezt. Kérdés, hogy a koleszterol kivonását követően a raftoktól való szétválás és a klaszteres mobilitás lehetővé teszi-e a hatékony ölést ez utóbbi antigénen keresztül is.