PEG10, egy humán endogén retroelem funkcionális vizsgálata

A PEG10 (paternally expressed gene 10) a humán génállományba integrálódott retrotranszpozon eredetű gén. Emberben a 7-es kromoszómán (7q21) lokalizálódik és expresszálódik a placentában, az agyban, a vesében, a májban, a csecsemőmirigyben, a tüdőben, a petefészekben és a lépben. Fokozott expressziója vélhetően szerepet játszik a B-sejtes akut és krónikus lymphoid leukémia és a hepatocelluláris carcinoma kialakulásában. A PEG10 génről képződő rövidebb (RF1) fehérje a retrovirusok Gag fehérjéjéhez hasonló, míg a -1 irányú riboszómális kereteltolódás révén szintetizálódó RF1-RF2 fehérje a retrovírusok Gag-Pol fehérjéjével mutat hasonlóságot. Az RF1-ben kimutatható a virális nukleokapszidra jellemző CCHC-típusú cink-ujj motívum, míg a RF1-RF2-ben megtalálható a virális proteáz katalitikus tripletjére jellemző -Asp-Thr/Ser-Gly- szekvencia.
Célul tűztük ki az eddig keveset tanulmányozott PEG10 proteáz (PR) és Gag fehérjék vizsgálatát, kezdve a fehérjék előállításával. A PEG10 génből PCR-al felsokszorozott proteáz szekvenciát pMal-c2-H6 expressziós vektorba klónoztuk, majd a fehérjét maltózkötő fehérjével és hexahisztidinnel jelölt fúziós fehérjeként expresszáltattuk. A fúziós fehérjét affinitás kromatográfiával tisztítottuk, majd Xa faktorral szabadítottuk fel a PEG10 proteázt. Hasonló stratégiát alkalmaztunk a PEG10 Gag fehérje tisztítására is.