A cöliakia, azaz lisztérzékenység, olyan autoimmun betegség, ahol a kalászos gabonafélékben jelen lévő glutén hatására a szöveti transzglutamináz enzim ellen termelődnek antitestek. Az anti-transzglutamináz antitestek(aTG) ELISA eljárással vagy szövetmetszeteken indirekt immunfluoreszcenciával (endomysium antitest – EMA) mérhetők és meghatározó szerepet játszanak a diagnózis kimondásában. Az EMA reakció nagyon specifikus, de idő- és munkaigényes. Az aTG mérésnél tisztított TG enzimet rögzítenek ELISA plate-re, ezzel reagálnak a betegek szérumából származó aTG antitestek. Az aTG mérésnél gyakrabban fordulnak elő álpozitív eredmények.
Célkitűzések és Módszerek: Mivel az ELISA módszerekhez az esetek többségében rekombináns technikával baktérium termeli meg a TG fehérjét, melynek tisztítása a fehérjén lévő járulékos aminosav szekvenciák segítségével történik, jelen munkánkban azt vizsgáltuk, hogy vannak-e olyan antitestek, melyek ezzel a járulékos szakasszal és valójában nem magával a TG fehérjével reagálnak. Ezért létrehoztunk egy olyan rekombináns fehérjét (B5), mely kizárólagosan ilyen járulékos aminosav szekvenciákból áll. Molekulatömegük alapján egyenlő mértékben fedtük a plate egyik részét a vad típusú baktériumban termelt TG-zal, másik részét a B5 fehérjével, majd 29 különböző, a rutin vizsgálat által aTG pozitívnak értékelt, de EMA reakcióra negatív szérumot vittünk fel mindkét kitapasztott fehérjére.
Eredmények: A vizsgált szérumok nagy részében jelentős reakciót láttunk a B5 fehérje ellen is, mely 12 mintában meghaladta a TG-re adott össz reakció 40 %-át (1.csoport), 6 mintában pedig közel azonos volt a teljes TG-re adott jellel (2.csoport). 6 mintával kompetitív ELISA-t végeztünk, ahol a vad típusú TG-zal fedett platen B5 jelenlétében (10 és 100ug/ml) vagy anélkül inkubáltuk a szérumokat. Az 1. és 2. csoportban is a B5-tel inkubált szérum reakciójánál abszorbancia csökkenést figyeltünk meg, amely jelentősebb volt a magasabb B5 koncentrációnál.
Következtetések: A B5 és a hozzá hasonló járulékos aminosav szekvenciák befolyásolhatják a rutin diagnosztikai laboratóriumokban mért aTG szinteket és felelősek lehetnek egyes álpozitív eredményekért.