Rekombináns lipoma-preferred partner protein készítése és molekuláris interakcióinak vizsgálata

A coeliákia (gluténszenzitív enteropátia, lisztérzékenység) az egyik leggyakoribb, étkezéssel kapcsolatos autoimmun betegség. A kórkép örökölhető (20-40%-ban fordul elő az utódokban), kialakulásához az MHC II-höz kapcsolódó HLA-DQ2 vagy -DQ8-allél jelenléte szükséges (de önmagában nem elégséges). A betegség legfontosabb tünete a villus atrófia, melyet a gliadin-specifikus T-limfociták, a szöveti transzglutamináz (TG2)-ellenes antitestek és a gyulladási folyamatok együttesen alakítanak ki. A közelmúltban (2008 és 2010) két nagy esetszámot feldolgozó GWA (genome wide association) tanulmány jelent meg, a LPP (lipoma preferred partner) protein génje mindkettőben feltűnt, mint gyakori SNP (single nucleotid polymorphism)-hordozó gén. Az LPP struktúrfehérje, szerepe van a sejtek letapadásában és migrációjában. 612 aminosav alkotja, C-terminális részét 3 LIM-domén építi fel, prolin-gazdag N-terminális része PQ-, illetve PQPQ-motívumokat hordoz, hasonló motívumok előfordulnak a toxikus gliadin-peptidekben is. A LIM-domének „Zn-ujj” motívumot tartalmazó, ciszteinben és hisztidinben gazdag fehérje domének, fehérje-fehérje interakcióban jelentős szerepet játszhatnak.
Munkánk célja a humán rekombináns LPP elkészítése és lehetséges molekuláris interakcióinak vizsgálata volt.
A humán LPP cDNS-ét az eredeti pCR-XL-TOPO vektorból pET-30 Ek/LIC vektorba klónoztuk át, majd szekvencia-ellenőrzés után bakteriális rendszerben fejeztük ki. A fehérjék tisztaságát SDS-poliakrilamid gélelektroforézissel és Western blot-tal ellenőriztük. ELISA technikával LPP-ellenes antitestek jelenlétét vizsgáltuk 14 coeliákiás és 8 normál szérummintában. 5 coeliákiás és 6 kontroll bélbiopsziás mintából származó cDNS mintában kerestük a LIM-domének esetleges szekvencia változásait.
Eredmények: a vizsgált szérummintákban az LPP-ellenes antitestek szintje alacsony volt, a coeliákiások átlaga magasabb volt, mint a kontrolloké. A LIM-domének szekvenciájában 2 mintában fordult elő nukleotid-csere, ezek aminosav változást nem okoztak.
Következtetések: az LPP LIM-doménjeinek aminosav szerkezete nem tér el a normálistól coeliákiás betegekben. Az LPP esetleges minor autoantigén szerepe további vizsgálatokat igényel.