Protein foszfatáz 2A gátlás hatásainak vizsgálata a WM35 és HT168 humán melanoma sejtvonalak sejtjeinek hialuronsav-termelő képességére és migrációs sajátságaira

A bőr daganatos betegségei közül a melanocyták kóros burjánzásából származó melanoma a legmalignusabb elváltozás kifejezett áttétképzési hajlama miatt.
A melanoma viselkedésének in vitro tanulmányozására eltérő sejtvonalakat hoztak létre. Mi két különböző biológiai viselkedésű humán melanoma sejtvonalat használtunk, a HT168 egy nagymértékben metasztatizáló, míg a WM35 metasztázist nem adó, invazív primer melanomából származik. A legtöbb melanoma a progresszió korai szakaszában hajlamos áttétek képzésére, melyek először a környező bőrben és regionális nyirokcsomókban jelennek meg. Ezen folyamatok során a melanoma sejtek környezetében változik az extracelluláris matrix összetétele különösen jelentős a hialuronsav-termelés fokozódása. A PP2A egy Ser/Thr specifikus protein foszfatáz, mely expressziója és szerkezete megváltozhat néhány malignus sejttípusban, így a melanomában is. Arról nincs adat, hogy a foszfatáz aktivitásának befolyásolása milyen hatással van a sejtek motilitására és ez a változás kapcsolatba hozható-e a melanoma sejtek hialuronsav termelésével. A PP2A farmakológiai inhibitorát; okadainsavat (OA) adva a sejtkultúrákhoz, mindkét sejtvonalban a mag területén érzékelhető kondenzációt figyeltünk meg. Boyden kamrában végzett migrációs kísérletek során, OA adagolás után a HT168 és a WM35 sejtvonal esetében is a sejtek migrációs képessége átlagosan 60%-al csökkent. Ennek a motilitáscsökkenésnek részben oka lehet a két sejtvonal hialuronsav termelésének változása is. RT-PCR-ral nyomon követtük két hialuronsav szintáz a HAS2 és HAS3 és a RHAMM (Receptor of Hyaluronan Mediated Motility) expresszióváltozását, de nem tapasztaltunk eltérést a kezelés hatására. Western blottal detektálva az egyes fehérjék expresszióját azonban az OA WM35 sejtvonalban csökkentette, míg a HT168 sejtvonal sejtjeiben növelte az enzimek expresszióját. A melanoma sejtek proliferációját 3H timidin beépülésével vizsgálva, mindkét sejtvonal esetében csökkenést detektáltunk.
Eredményeink jelzik, hogy a PP2A-által mediált mechanizmusok fontos szerepet töltenek be a melanoma migrációs képességének szabályozásában és részben hatással vannak a sejtek hialuronsavtermelésére is.
Támogató:OTKA CNK 80709